Отмучивание противоточным центрифугированием - Counterflow centrifugation elutriation
 | Эта статья включает в себя список общих Рекомендации, но он остается в основном непроверенным, потому что ему не хватает соответствующих встроенные цитаты. (Ноябрь 2017 г.) (Узнайте, как и когда удалить этот шаблон сообщения) |
Центробежное отмучивание противотоком (CCE) представляет собой метод очистки жидкости. Этот метод позволяет ученые для разделения разных ячеек разного размера. Поскольку размер ячейки коррелирует с клеточный цикл Стадии этот метод также позволяет разделить клетки на разных стадиях клеточного цикла.[1]
Принцип
Ключевая концепция заключается в том, что более крупные клетки, как правило, остаются в протекающем буферный раствор в то время как более мелкие клетки будут вымываться буферным раствором (разные седиментационные свойства в буферном растворе), и клетки будут иметь разные седиментационные свойства на разных стадиях клеточного цикла.[2][3]
Основной принцип разделения ячеек внутри CCE - это баланс между центростремительной силой и силой сопротивления противотока. Когда клетки попадают в камеру отмучивания, все клетки остаются на внешнем крае камеры из-за центробежной силы. Затем, когда скорость потока буферного раствора увеличивается, раствор стремится подтолкнуть клетки к середине CCE. Когда сила сопротивления встречного потока превышает центростремительную силу, частицы будут перемещаться под действием чистой силы и покидать камеру. Более мелкие частицы могут покидать камеру при меньших расходах. Напротив, более крупные частицы останутся в камере отмучивания. Следовательно, скорость потока буфера можно использовать для управления сортировкой по размеру в камере отмучивания.[4]
Преимущества
Во время разделения клетку нужно только суспендировать в буферном растворе и ввести в центрифуга, весь процесс не включает в себя какое-либо химическое (например, окрашивание) и физическое (например, прикрепление антитела, лизис клеточной мембраны) воздействие на клетки, поэтому клетка останется неизменной до и после разделения. Благодаря этому собранные клетки можно использовать для дальнейшего эксперимента или дальнейшего разделения другими методами. Наконец, CCE полагается на центробежную силу и силу сопротивления противотока для разделения ячеек, поэтому скорость разделения высока. В итоге:
- Минимальное воздействие на клетки
- Высокая жизнеспособность восстановления
- Разделенные ячейки можно использовать в дальнейшем
- Быстрый
Недостатки
Как упоминалось выше, CCE разделяет клетки на основе их седиментационных свойств, но не на основе конкретных характеристик (например, поверхностный белок, форма клетки). Он не может разделить разные типы клеток, которые имеют сходные седиментационные свойства. Это означает, что для образца со смешанным типом клеток необходимо провести предварительную очистку. CCE также ограничивается клетками, которые можно индивидуально суспендировать в буферном растворе. Ячейки, которые всегда к чему-то прикреплены, не могут быть отделены CCE.
Рекомендации
- ^ Банфальви, Гаспар (27 марта 2008 г.). «Синхронизация клеточного цикла животных клеток и ядер путем центробежного отмучивания». Протоколы природы. 3 (4): 663–673. Дои:10.1038 / nprot.2008.34. PMID 18388949.
- ^ «Дом - Журнал крови». Bloodjournal.hemologylibrary.org. Получено 21 ноября 2017.
- ^ «Радикальная наука». Freeradicalscience.com. Получено 21 ноября 2017.
- ^ Сандерсон, Ричард (апрель 1976 г.). «Принципы проектирования камеры разделения ячеек противоточного центрифугирования». Аналитическая биохимия. 71 (2): 615–622. Дои:10.1016 / S0003-2697 (76) 80036-X. PMID 1275265.